Estandarización de una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) para la detección de Strongyloides stercoralis en muestras de materia fecal

  • Laura F. Campo-Polanco Universidad de Antioquia, Universidad Pontificia Bolivariana
  • José M. Hernández-Sarmiento Universidad Pontificia Bolivariana
  • Luz E. Botero-Palacio Universidad Pontificia Bolivariana
  • Lina A. Gutiérrez-Builes Universidad Pontificia Bolivariana
Palabras clave: Strongyloides stercoralis, estandarización, reacción en cadena de la polimerasa, qPCR, técnicas de diagnóstico molecular.

Resumen

Introducción: el diagnóstico de estrongiloidiasis se realiza de rutina en los laboratorios clínicos; sin embargo, su detección se dificulta debido a la baja excreción parasitaria y la baja sensibilidad de las pruebas parasitológicas empleadas. Objetivo: diseñar y estandarizar una PCR en tiempo real (qPCR) para la detección de ADN de Strongyloides stercoralis en muestras de materia fecal. Materiales y métodos: se establecieron las condiciones de qPCR y se evaluaron: a) la especificidad analítica mediante análisis BLASTn de secuencias obtenidas de muestras positivas para Strongyloides stercoralis, b) sensibilidad analítica mediante diluciones seriadas de muestras que contenían larvas de Strongyloides stercoralis y c) la ocurrencia de reacciones cruzadas con otros parásitos e inhibidores de la amplificación. Resultados: se amplificó un fragmento de 101 pb del gen 18S del ARN ribosomal. El valor de Ct osciló entre 23 y 29, tomando un Ct ≤35 como el punto de corte para muestras positivas. El análisis BLASTn de las secuencias obtenidas mostró un porcentaje de identidad del 98% con secuencias 18S del ARN ribosomal de Strongyloides stercoralis reportadas en la NCBI. El límite inferior de detección de la qPCR fue 0,9 ng/µL. No se evidenció reacción cruzada con Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Uncinarias, Hymenolepis nana, Entamoeba histolytica/Entamoeba dispar, Entamoeba hartmanni, Giardia intestinalis e Iodamoeba bütschlii. No se detectaron inhibidores en las muestras de materia fecal. Conclusiones: la sensibilidad y la especificidad analítica de la qPCR comparado con el examen directo de heces son del 100%; sin embargo, aún no es posible interpretar su utilidad clínica.

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Biografía del autor/a

Laura F. Campo-Polanco, Universidad de Antioquia, Universidad Pontificia Bolivariana

Microbióloga y Bioanalista, MSc en Microbiología y Bioanálisis. Docente de cátedra, Universidad de Antioquia. Investigadora, Grupo de Biología de Sistemas, Escuela de Ciencias de la Salud, Facultad de Medicina, Universidad Pontificia Bolivariana. Medellín, Colombia.

José M. Hernández-Sarmiento, Universidad Pontificia Bolivariana

Médico, MSc y PhD en Ciencias Médicas. Docente, Universidad Pontificia Bolivariana. Investigador, Unidad de Bacteriología y Micobacterias, Corporación para Investigaciones Biológicas (CIB). Medellín, Colombia.

Luz E. Botero-Palacio, Universidad Pontificia Bolivariana

Bacterióloga y Laboratorista Clínica, Especialista en Gerencia en Economía y Finanzas de la Salud, MSc en Ciencias Básicas Biomédicas, PhD en Ciencias Médicas. Docente e investigadora, Grupo de Biología de Sistemas, Escuela de Ciencias de la Salud, Facultad de Medicina, Universidad Pontificia Bolivariana. Medellín, Colombia.

Lina A. Gutiérrez-Builes, Universidad Pontificia Bolivariana

Bacterióloga y Laboratorista Clínica, PhD en Ciencias Básicas Biomédicas. Docente e investigadora, Grupo de Biología de Sistemas, Escuela de Ciencias de la Salud, Facultad de Medicina, Universidad Pontificia Bolivariana. Medellín, Colombia.

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Cómo citar
1.
Campo-Polanco LF, Hernández-Sarmiento JM, Botero-Palacio LE, Gutiérrez-Builes LA. Estandarización de una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR) para la detección de Strongyloides stercoralis en muestras de materia fecal. Med. Lab. [Internet]. 1 de septiembre de 2016 [citado 30 de octubre de 2020];22(9-10):459-78. Disponible en: https://medicinaylaboratorio.com/index.php/myl/article/view/94
Publicado
2016-09-01
Sección
Artículos originales